Navnið á háttalagnum einsamalt sigur tó ikki, hvat frágreiðingin skjalprógvar. Tað má vera greitt, hvat signal er mált, hvør útrokning er nýtt og hvørji evni háttalagið kann skilja sundur.
HPLC vísir sundurskiljing undir ávísum umstøðum
HPLC stendur fyri high-performance liquid chromatography. Partarnir í royndini fara gjøgnum eina súlu saman við einum vætustreymi. Munir í samspælinum við súluna og vætuna geva ymiskar retentiónstíðir, tað er tíðin, til eitt evni verður skrásett av detektaranum.
Eitt kromatogramm vísir signal detektarans yvir tíð. Í peptidgreiningum verður UV-greining ofta nýtt. Ein høvuðstoppur og smærri toppar kunnu geva upplýsingar um samansetingina, men tvey evni kunnu eisini koma út samstundis. Ein toppur nýtist tí ikki at umboða bert eitt evni.
Retentiónstíð er knýtt at greiningarumstøðunum. Ein tíð frá einum háttalagi kann ikki nýtast sum alment eyðkenni í einum øðrum. Frágreiðingin má geva nóg mikið av upplýsingum til, at starvsstovan kann greiða frá, hvat topparnir og flatarmálsútrokningin merkja.
LC-MS knýtir massaupplýsingar at toppunum
Eitt massaspektrometur skrásetir jónir eftir lutfallinum millum massa og løðing, m/z. Peptid kunnu geva jónir við fleiri løðingum. Tulking av hesum signalum kann geva ein útroknaðan sameindamassa, sum verður samanborin við væntaðan massa.
Zeng og starvsfelagar kannaðu LC-HRMS, vætukromatografi við massaspektrometri í høgari upploysing, til góðskueftirlit av trimum peptidheilivágum í 2015. Arbeiðið vísir, hvussu massaupplýsingar kunnu hjálpa til at kanna óreinindi og munir millum royndir, sum kromatografi einsamøll ikki greiðir nóg væl frá.
Ein massi, sum samsvarar við væntanina, er ein gagnlig upplýsing. Bygnaðir við sama massa kunnu tó krevja fleiri kanningar. LC-MS/MS greinar brot av útvaldum jónum og kann geva fleiri upplýsingar um røðina. Hvat er váttað, má síggjast av sjálvari tulkingini.
Vel mátingina út frá spurninginum
Reinleikamynstur, samleiki og nøgdarmált innihald krevja ymiskar metingar. Við innihaldsáseting er neyðugt við einum skilmarkaðum lutfalli millum nøgd og mátingarsignal. Tað kann millum annað fevna um kalibrering og hóskandi tilvísingartilfar. Eitt flatarmál frá einum kromatografiskum toppi er ikki sjálvvirkandi eitt liðugt nøgdarmát.
Massaspektrometriskur signalstyrkur verður eisini ávirkaður av jónisering og tólumstøðum. Tvey evni kunnu geva ymisk signal við somu nøgd. At býta eitt MS-signal við summuni av øllum signalunum gevur tí ikki uttan víðari eitt álítandi massaprosent.
| Spurningur | Viðkomandi upplýsingar | Avmarking |
|---|---|---|
| Hvørjir partar verða skildir sundur? | Kromatogramm og lýsing av háttalagnum | Partar kunnu skara saman |
| Samsvarar massin við væntanina? | Tulkað LC-MS ella LC-HRMS | Sami massi kann hava fleiri bygnaðarligar frágreiðingar |
| Er røðin kannað? | Brotupplýsingar frá LC-MS/MS og møgulig ískoytisgreining | Dekningur og tulkingargrundarlag mugu metast |
| Hvussu nógv peptid er har? | Nøgdarmátandi háttalag við skilmarkaðum útrokningargrundarlagi | Flatarmálsreinleiki einsamall svarar ikki hesum |
Eitt háttalag má hóska til ta ávísa royndina
Selektivitetur lýsir, hvussu væl háttalagið skilur greinievnið frá øðrum pørtum. Nágreinileiki (precision) snýr seg um frávik millum mátingar; neyvleiki (accuracy) snýr seg um, hvussu væl úrslitini samsvara við eina góðtikna tilvísing. Hesir eginleikar verða mettir fyri ávísu greiningaruppgávuna, ikki bert fyri tólslagið.
Kanningar av LC-MS/MS-skipanum nýta eisini mát fyri millum annað kromatografisk avrik, massaneyvleika og signalstyrki. Slíkt eftirlit kann avdúka, at ein skipan virkar øðrvísi frá einari røð til ta næstu. Tað er ein orsøk til at spyrja um, hvørt skipanin er hóskandi, tá frágreiðingar verða samanbornar.
Eitt háttalag, sum virkar væl fyri eitt peptid, er ikki neyðturviliga líka selektivt fyri eitt annað. Heiti sum HPLC-kannað ella MS-váttað eiga tí at hava eina ítøkiliga frágreiðing um, hvat kanningin fevnir um.
Aðrir eginleikar krevja egnar kanningar
Sterilitetur, endotoksin og leivdir av loysingarevnum eru egin greiningarøki. Eitt vanligt kromatogramm ella massaspektrum gevur ikki eina samlaða niðurstøðu um tey. Møgulig úrslit mugu finnast sum serstakar, eyðmerktar kanningar við egnum mørkum.
Leiðreglan hjá EMA fyri syntetisk peptid umrøður fleiri slíkar góðskueginleikar í heilivágsmenning. Hon verður her nýtt sum faklig tilvísing til munin millum mátingarnar. Hon ger ikki eitt ráevni til góðkendan heilivág og skjalprógvar ikki trygd hjá menniskjum.
Tá tú lesur eitt COA, skriva tí niður, hvørjum spurningi hvørt úrslit svarar. Manglar ein neyðug máting, eigur hon at verða skrásett sum manglandi skjalprógv heldur enn at verða fylt við einari giting um, hvat ein onnur kanning merkir.
Keldur
ArcticAmino selur granskingartilfar. Greinarnar eru skrivaðar av veitaranum og taka saman keldur til upplýsingar. Tær eru ikki læknalig ráð ella nýtsluleiðbeiningar. Ein greiningarváttan ger ikki eitt granskingartilfar til góðkendan heilivág.